在生命科學(xué)研究里，電子顯微鏡是探索納米世界的“千里眼”。然而傳統(tǒng)制樣要把細(xì)胞脫水、包埋、染色，蛋白質(zhì)、脂質(zhì)往往皺縮或移位，得到的是“加工后”而非“原生”的照片。徠卡冷凍超薄切片系統(tǒng)與CEMOVIS技術(shù)的結(jié)合，則像給樣品按下“暫停鍵”，讓科學(xué)家第一次在近乎天然的水合狀態(tài)下看清細(xì)胞內(nèi)部。 一、什么是CEMOVIS
CEMOVIS的核心是把含水生物樣品以每秒上萬度的速度投入−180°C的液態(tài)乙烷或丙烷，水分子來不及結(jié)晶便形成非晶態(tài)冰，瞬間鎖住細(xì)胞骨架、囊泡乃至大分子復(fù)合體。隨后，樣品在−160°C的冷凍超薄切片機(jī)（如Leica EM FC7）上被切成50–200 nm的“冰膜”，直接轉(zhuǎn)移到冷凍電鏡（cryo-TEM）中成像，全程不接觸任何化學(xué)試劑。
二、冷凍超薄切片系統(tǒng)的關(guān)鍵角色
低溫環(huán)境與防震：切片倉通液氮維持−160°C，金剛石刀與樣品臺(tái)溫差＜0.1°C，防止熱漂移；主動(dòng)減震臺(tái)把振幅降到納米級(jí)。
無應(yīng)力進(jìn)給：步進(jìn)馬達(dá)最小進(jìn)給量0.5 nm，配合離子束減?。蛇x），保證“冰膜”厚度均勻，無壓縮痕。
自動(dòng)收集：防靜電的冷凍傳送臂把切片“釣”到銅網(wǎng)上，網(wǎng)格化存儲(chǔ)，實(shí)現(xiàn)高通量。
三、CEMOVIS帶來的三大突破
原生結(jié)構(gòu)：無需染色，電子密度差異直接反映質(zhì)量厚度，可量化核糖體、病毒衣殼的分子量。
三維關(guān)聯(lián)：連續(xù)切片后，用冷凍電子斷層掃描（cryo-ET）拼接，獲得200 nm厚的細(xì)胞三維圖譜，分辨率2–4 nm。
動(dòng)態(tài)捕捉：結(jié)合光-電關(guān)聯(lián)（CLEM），先用熒光標(biāo)記活細(xì)胞事件，再快速冷凍，鎖定特定時(shí)間點(diǎn)的超微結(jié)構(gòu)。
四、應(yīng)用實(shí)例
HIV-1病毒：CEMOVIS揭示病毒包膜與宿主膜融合瞬間，發(fā)現(xiàn)gp120三聚體呈“閉合-開放”兩種構(gòu)象，為疫苗設(shè)計(jì)提供新靶點(diǎn)。
神經(jīng)元突觸：在−160°C切片中，首測突觸囊泡與質(zhì)膜間距僅3 nm，說明神經(jīng)遞質(zhì)釋放前膜曲率尚未翻轉(zhuǎn)。
葉綠體：玻璃化切片保留類囊體腔水相，直接看到光系統(tǒng)II放氧復(fù)合體的側(cè)向異質(zhì)性，為人工光合研究提供天然模板。
五、挑戰(zhàn)與展望
CEMOVIS對操作者經(jīng)驗(yàn)要求高，切片易產(chǎn)生皺褶、刀痕；樣品厚度受限于電子穿透力。最新趨勢是把聚焦離子束（FIB）“銑”出的冷凍薄片與CEMOVIS互補(bǔ)，實(shí)現(xiàn)更大體積的無縫成像。隨著冷凍光電關(guān)聯(lián)、相位板、直接電子探測器的普及，CEMOVIS正從“看得見”走向“看得準(zhǔn)、看得全”，成為連接細(xì)胞生物學(xué)與結(jié)構(gòu)生物學(xué)的橋梁。
歡迎來到上海進(jìn)與科學(xué)儀器有限公司網(wǎng)站！
地址：上海市閔行區(qū)新鎮(zhèn)路1699號(hào)七寶傳媒谷B棟5層02單元
郵箱：mingyu.jiang@shjoinu.com 
座機(jī)：021-64199606
掃一掃
網(wǎng)站首頁
